Authors:	Yakoub, Kirsten
Title:	Charakterisierung Delta-enthaltender GABAA-Rezeptoren: Abfolge einzelner Untereinheiten im Pentamer und Untersuchung spezifischer Liganden
Other Title:	Charakterisierung δ-enthaltender GABAA-Rezeptoren: Abfolge einzelner Untereinheiten im Pentamer und Untersuchung spezifischer Liganden
Online publication date:	14-Apr-2019
Year of first publication:	2019
Language:	german
Abstract:	Im Rahmen der Dissertation wurde der Aufbau konkatamerer GABAA Rezeptoren (GABAAR) untersucht. Konkatamere sind kovalent verlinkte Untereinheiten, mit deren Hilfe die Abfolge einzelner Untereinheiten im pentameren Rezeptorkomplex untersucht werden kann. Speziell sollen die verlinkten Rezeptoren zur Aufklärung des bislang unbekannten Aufbaus δ-enthaltender GABAAR beitragen. Rezeptoren wurden hierzu in der Radioligandenbindung und der Dichtegradientzentrifugation charakterisiert. Konkatamere aus vier verlinkten Untereinheiten zeigten dabei geringere Artefakt-Bildung bei alleiniger Transfektion und eine weniger flexible Assemblierungrichtung als 2er oder 3er Konkatamere und könnten somit zur Strukturaufklärung beitragen. In der Dichtegradientzentrifugation zeigten Rezeptoren und Artefakte aus 2er Konkatameren dasselbe Sedimentationsverhalten, was auf die Bildung von Pentameren mit heraushängender Untereinheit hindeutet. Zudem wurden in einer Structure-Activity-Relationship Studie 25 Derivate der als δ-selektiv publizierten Leitstrukturen DS1 und DS2 untersucht. DS1 zeigte dabei neben einem direkten Effekt auf die [³H]EBOB-Modulation verschiedener rekombinanter GABAAR keine Selektivität, aber eine erhöhte Präferenz für δ-enthaltende Rezeptoren. Dagegen zeigten vier der Derivate (29, 38, 39, 41) δ-Selektivität in Abwesenheit von GABA. Der größte strukturelle Unterschied zur Leitstruktur DS1 ist der Substituent in para-Position des Benzamids. Zwei der δ-selektiven Derivate zeichneten sich durch eine akzeptable Effizienz und Potenz in der [³H]EBOB-Modulation aus und könnten zur Charakterisierung von α6β3δ GABAAR beitragen. In this dissertation the assembly of concatenated GABAA receptors (GABAAR) was investigated. Concatemers are covalently linked subunits which can be used to examine the order of single subunits in the pentamer, especially for δ-containing GABAAR with so far unknown composition. Receptors were characterized with radioligand assays and density gradient centrifugation. Concatemers consisting of four subunits showed less artefact formation when transfected alone and less flexible assembly order than double and triple concatemers. This could make them suitable for subunit assembly investigation. In the density gradient receptors and artefacts of double concatemers showed the same sedimentation behavior, which could hint to the formation of pentamers with dangling subunits. Additionally, a structure-activity-relationship study was performed with 25 derivatives of the published δ-selective compounds DS1 and DS2. DS1 showed a direct activation of several recombinant GABAAR in [³H]EBOB modulation assays with a preference, but no selectivity for δ-containing receptors. Four of the derivatives (29, 38, 39, 41) showed δ-selectivity in the absence of GABA. The biggest difference to the lead compound DS1 was the substituent in the para-position of the benzamide. Two of the δ-selective derivatives exhibited an acceptable efficiency and potency in the [³H]EBOB modulation and could help to characterize α6β3δ GABAAR.
DDC:	500 Naturwissenschaften 500 Natural sciences and mathematics
Institution:	Johannes Gutenberg-Universität Mainz
Department:	FB 09 Chemie, Pharmazie u. Geowissensch. FB 04 Medizin
Place:	Mainz
ROR:	https://ror.org/023b0x485
DOI:	http://doi.org/10.25358/openscience-4814
URN:	urn:nbn:de:hebis:77-diss-1000027238
Version:	Original work
Publication type:	Dissertation
License:	In Copyright
Information on rights of use:	https://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/
Extent:	182, 51 Seiten
Appears in collections:	JGU-Publikationen