Autoren:	Altenhöfer, Sebastian
Titel:	Der enzymatische und anti-oxidative Mechanismus des anti-atherogenen Enzyms Paraoxonase-2
Online-Publikationsdatum:	8-Jun-2010
Erscheinungsdatum:	2010
Sprache des Dokuments:	Deutsch
Zusammenfassung/Abstract:	Das humane Enzym PON2 ist in eine Vielzahl pathophysiologischer Prozesse involviert und ist durch zwei Funktionen gekennzeichnet - eine enzymatische Laktonase-Aktivität und eine anti-oxidative Aktivität. Durch die Laktonase-Aktivität hydrolysiert PON2 vorwiegend das bakterielle Signalmolekül 3oxoC12. PON2 ist als Bestandteil des angeborenen Immunsystems anzusehen und trägt wahrscheinlich zur Immunabwehr gegen Infektionen mit den human-pathogenen Pseudomonas aeruginosa Bakterien bei. Durch die anti-oxidative Aktivität vermindert PON2 oxidative Schäden und verringert redox-abhängige pro-apoptotische Stimulation. Diese einzigartige Funktion von PON2 ist jedoch ambivalent zu betrachten, da hohe PON2-Spiegel zwar Arteriosklerose reduzieren können, aber im Verdacht stehen Tumorzellen zu stabilisieren.rnIn dieser Arbeit wurden die noch unbekannten Mechanismen und der Zusammenhang der enzymatischen und der anti-oxidativen Aktivität analysiert. In diesem Rahmen wurde gezeigt, dass PON2 spezifisch die Superoxidfreisetzung an Komplex I und III der Atmungskette in der inneren Mitochondrienmembran reduzieren kann. PON2 veränderte dabei weder die Aktivitäten der Superoxiddismutasen noch die Cytochrom C-Expression. Weiterhin konnte in dieser Arbeit erstmals gezeigt werden, dass PON2 O2- nicht direkt abbaut, sondern vielmehr dessen Bildung verhindert. Diese Erkenntnisse implizieren, dass PON2 die anti-oxidative Aktivität über eine Beeinflussung des Quinon-Pools vermittelt. Anhand von verschiedenen Punktmutationen konnte gezeigt werden, dass die Histidinreste-114 und -133 für die Laktonase-Aktivität essentiell sind. Weiterhin wurden die Glykosylierungsstellen von PON2 identifiziert und gezeigt, dass die Glykosylierung, nicht aber der natürliche Polymorphismus Ser/Cys311 für die Laktonase-Aktivität von Bedeutung ist. Von besonderer Bedeutung ist, dass keine dieser Mutationen die anti-oxidative Aktivität beeinflusste, wodurch erstmals die Unabhängigkeit der beiden Funktionen von PON2 gezeigt werden konnte. rnEs war bekannt, dass PON2 gegen intrinsische und ER-Stress-induzierte Apoptose schützt. Die Spezifität der anti-oxidativen / anti-apoptotischen Wirkung wurde hier an einem weiteren pathophysiologischen Modell untersucht. 7- Ketocholesterol (7-KC) ist der Hauptbestandteil des pro-arteriosklerotischen oxLDL und verursacht in Zellen des Gefäßsystems ER-Stress, oxidativen Stress und Apoptose. Unerwarteterweise konnte PON2 Endothelzellen nicht gegen den 7-KC-induzierten Zelltod schützen. Mehrere unabhängige experimentelle Ansätze belegen, dass 7-KC in Endothelzellen im Gegensatz zu Gefäßmuskelzellen den Zelltod über Autophagie und nicht über ER-Stress oder intrinsische Apoptose bewirkt. Weiterhin führt 7-KC, wie auch 3oxoC12 und Thapsigargin zu einem Abbau der PON2-mRNA, die über die 5’UTR der PON2-mRNA vermittelt wird. Diese Arbeit vermittelt detaillierte mechanistische Einsichten in die Funktionen von PON2, die für ihre Rolle bei Arteriosklerose, in der körpereigenen Immunabwehr und bei Krebs entscheidend sind.rn The human enzyme paraoxonase-2 (PON2) has two important functions, an enzymatic lactonase activity and the reduction of intracellular oxidative stress. By its enzymatic function, it dominantly inactivates bacterial lactone signalling molecule 3oxoC12, thus PON2, as factor of the innate immunity, represents an important defence mechanism against infections by the human pathogen Pseudomonas aeruginosa. By its anti-oxidative effect, PON2 protects cells from oxidative damage and confers resistance to cytotoxic stimuli, as it diminishes redox-mediated mitochondrial cell death signalling. However, this protective anti-apoptotic effect of PON2 may be both appreciated and deleterious: high PON2 levels seem to protect against atherosclerosis, but it may also favour tumour development due to increased apoptotic escape. This study addressed the yet unknown mechanisms and relatedness of PON2 enzymatic and anti-oxidative function.rnHere I show that PON2 specifically reduced superoxide production at complex-I or complex-III of the electron transport chain in the inner mitochondrial membrane. Thereby PON2 didn’t change expression levels of cytochrome c or activities of superoxide dismutases. Further this study showed for the first time that PON2 can‘t scavenge O2- but diminishes its generation most likely by interacting with the quinone pool. Specific mutations of several amino acids showed that His114 and His133 are essential for the lactonase activity of PON2. Glycosylation sites of PON2 were also identified and proved to be essential for its lactonase activity in contrast to its native polymorphism Ser/Cys311. Importantly, none of these mutations altered PON2 anti-oxidative / anti-apoptotic function, demonstrating unrelated functions of the same protein. rnThe capability of PON2 to protect cells against intrinsic or ER stress mediated apoptosis is well established. The specificity of its anti-oxidative / anti-apoptotic effects was tested in another pathophysiological model. 7- ketocholesterol (7-KC) is the main constituent of pro-atherogenic oxLDL and causes ER stress, oxidative stress and apoptosis in smooth muscle cells of the vascular wall. This was tested for endothelial cells. Several lines of evidence demonstrate that 7-KC induced ER stress and autophagy in endothelial cells, which may ultimately result in cell death. Importantly, this type of cell death showed no signs of apoptosis and was not diminished by enhanced PON2 expression, in accordance with its anti-apoptotic function. To further elucidate mechanisms leading to lacking effect of PON2, I addressed expression levels and found that 7-KC, like thapsigargin and the lactone 3oxoC12, lead to PON2 mRNA degradation. The responsive element located to its 5’UTR.rnCollectively, this study provides detailed mechanistic insight into the functions of PON2 and discriminates its effect on different pathways, which is important for its role in innate host defence, atherosclerosis and cancer.rn
DDC-Sachgruppe:	500 Naturwissenschaften 500 Natural sciences and mathematics
Veröffentlichende Institution:	Johannes Gutenberg-Universität Mainz
Organisationseinheit:	FB 04 Medizin
Veröffentlichungsort:	Mainz
ROR:	https://ror.org/023b0x485
DOI:	http://doi.org/10.25358/openscience-2288
URN:	urn:nbn:de:hebis:77-22902
Version:	Original work
Publikationstyp:	Dissertation
Nutzungsrechte:	Urheberrechtsschutz
Informationen zu den Nutzungsrechten:	https://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/
Umfang:	157 S.
Enthalten in den Sammlungen:	JGU-Publikationen