Authors:	Gadomsky, Christian
Title:	Suche nach Zielgenen des T-Box-Transkriptionsfaktors Optomotor-blind aus Drosophila melanogaster
Online publication date:	1-Dec-2011
Year of first publication:	2011
Language:	german
Abstract:	Zusammenfassung:rnrnDas Ziel der Arbeit bestand darin mehr über die Funktion des T-Box Transkriptionsfaktors Omb zu erfahren. Dm omb ist der nächste Verwandte zu Hs Tbx2/3, die wegen ihrer Rolle bei verschiedenen Krebsarten für die Entwicklung neuer Therapien bedeutsam sind. rnIn drei, von Herrn Pflugfelder hergestellten, omb Allelen l(1)omb282, l(1)omb12, l(1)omb15 wurden neue Mutationen kartiert. Dabei handelt es sich um zwei missense-Mutationen und eine Stopmutation. Sie betreffen Aminosäurereste, die in allen T-Box Proteinen konserviert sind und daher vermutlich lebenswichtige Proteinabschnitte betreffen. In EMSA Versuchen konnte gezeigt werden, dass die missense-Mutationen die DNA-Bindung des Omb-T Proteins verhindern.rnFür die Suche nach Omb Zielgenen wurden Gene und phylogenetisch konservierte TBE-Genabschnitte auf ihre Regulation durch Omb getestet. Dabei wurde das Expressionsmuster von Genen mitels in situ und das Muster von enhancer getriebener β-Gal Expression histochemisch oder durch Immunfärbung von wildtypischen und l(1)omb15 Larven des dritten Stadiums verglichen. rnUpstream der mirr Transkriptionseinheit wurde ein cis-regulatorisches TBE-Fragment identifiziert, das ein Aktivitätsmuster in Flügelimaginalscheiben zeigte, welches dem von Mirr nahe kommt. Sowohl ein Omb Verlust als auch die Mutation der TBE Sequenz führten zu einer ähnlichen ektopischen Aktivierung des Fragments, was auf eine Abhängigkeit von Omb hinweist. rnIn der intronischen Sequenz von inv wurde ebenfalls ein TBE-Fragment entdeckt, das eine β-Gal-Aktivität in Flügelscheiben des späten L3 Stadiums anterior der A/P Grenze zeigte. Diese Expression könnte sich mit der späten für en/inv beschriebenen Expression (Blair, 1992) decken. Immunfärbungen bestätigten, dass der Verlust dieser Aktivität in omb0 tatsächlich durch den Verlust von Omb hervorgerufen wird und nicht durch eine Entwicklungsverzögerung der Larven verursacht wird.rnSchließlich wurde durch die Reparatur von TBX Expressionsvektoren eine Konstruktreihe (Legler, 2010) fertiggestellt, mit deren Hilfe die Auswirkungen einer Überexpression auf die Zellmotilität in Drosophila untersucht werden kann. Das soll helfen den Einfluss von TBX Proteinen auf die Invasivität von Krebszellen zu verstehen.rn Summary:\r\n\r\nThe aim of this work was to learn more about the function of the transcription factor Omb. Dm omb is the closest relative to the Hs Tbx2/3. They play an important role in the development of new therapies, due to their role in different cancers.\r\nNew mutations were mapped in the omb alleles l1)omb282, l(1)omb12 and l(1)omb15, that have been isolated by Mr. Pflugfelder. These are two missense and one nonsense mutation. They concern amino acids conserved in all T-box proteins and are therefore thought to affect essential protein domains. In EMSA experiments it could be shown, that the missense mutations prevent the DNA-binding of the Omb-T protein.\r\nIn order to identify omb targets, genes and phylogenetic conserved TBE fragments were tested for their regulation by Omb. Gene expression patterns and enhancer driven βGal expression in wt and omb mutant imaginal discs were compared histochemically, by in situ hybridization and by immunostainings.\r\nA cis-regulatory element was identified upstream of the mirr transcription unit showing a pattern in wing discs, that reflects most of the endogenous Mirr pattern. Both, the loss of omb function and the TBE mutation led to a similar ectopic activation of the fragment showing the dependence of Omb.\r\nA TBE fragment has also been identified in the intronic sequence of inv showing a late βGal activity in wing discs anterior to the A/P boundary. This expression could match with the expression, which has been described for en/inv (Blair 1992). Immunostainings confirmed, that the loss of this activity in omb0 is indeed due to the loss of Omb and not caused by a developmental delay of the larvae.\r\nFinally, by repairing Tbx expression vectors a collection of constructs (Legler 2010) was completed allowing to investigate the effects of an overexpression on the cell motility in Drosophila. This should help to understand the influence of TBX proteins on the invasiveness of tumor cells.\r\n
DDC:	570 Biowissenschaften 570 Life sciences
Institution:	Johannes Gutenberg-Universität Mainz
Department:	FB 10 Biologie
Place:	Mainz
ROR:	https://ror.org/023b0x485
DOI:	http://doi.org/10.25358/openscience-2117
URN:	urn:nbn:de:hebis:77-29431
Version:	Original work
Publication type:	Dissertation
License:	In Copyright
Information on rights of use:	https://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/
Extent:	167 S.
Appears in collections:	JGU-Publikationen