Authors:	Fondel, Sabine
Title:	Genitalrekonstruktion bei Patienten mit Zustand nach Rhabdomyosarkom des Urogenitaltraktes und Strahlentherapie des kleinen Beckens
Online publication date:	1-Jan-2001
Year of first publication:	2001
Language:	german
Abstract:	Zusammenfassung Humane Mundschleimhaut wurde mit Hilfe eines speziellen dreidimensionalen Zellkultivierungssystems in vitro in großen, zusammenhängenden Arealen gezüchtet. Hierbei handelte es sich um eine methodische Eigenentwicklung, welche die gewebespezifische Mikroumgebung der humanen Mundhöhle optimal nachbildet. Die Beurteilung der physiologischen Integrität des gezüchteten Humangewebes erfolgte durch eine Vielzahl von Kenngrößen. Zu diesen Beurteilungskriterien zählten unter anderem die Expression von Cytokeratinen, die Ausprägung von Komponenten des Cytoskeletts und der extrazellulären Matrix sowie die Detektion von genetischen Mutationen. Mit zunehmender Kultivierungsdauer konnten in den organotypischen Co-Kulturen, neben der Synthese der mesenchymalen Marker Fibronectin und Tenascin, eine gesteigerte Expression des Universalmarkers Cytokeratin 14 sowie der differenzierungsspezifischen Cytokeratine 4 und 13 beobachtet werden. Die Cytokeratinproduktion war ebenfalls, wie das vermehrte Auftreten der interzellulären Bindungselemente Desmoglein 2 und Desmoplakine 1 bzw. 2, ausschließlich auf die epithelialen Zellschichten beschränkt. Nach 14tägiger Kultivierung zeigte sich in der PAS-Färbung die Ausbildung der Basalmembran, die immuncytochemisch mit einer gesteigerten Expression der Hauptkomponenten Collagen Typ IV und Laminin korrelierte. Die Beurteilung des morphologischen Gesamtbilds in der H/E-Darstellung zeigte große strukturelle Gemeinsamkeiten zwischen dem in vitro gezüchteten und dem physiologischen Nativgewebe. Wie die abschließenden Mutationsuntersuchungen bezüglich des Tumorsuppressorgens p53 ergaben, konnten bei den isolierten Epithel- und Bindegewebszellen keine genetischen Alterationen im Sinne einer neoplastischen Entartung gefunden werden. Summary In order to get a differentiated human mouth mucosa in vitro we must develope a special culture technique and a new three dimensional cultivation system, which simulate the in vivo situation of the mouth cavity. The physiological integrity of this cultivated mucosa was immunocytochemically examined by expression of Cytokeratins (4, 13, 14), Desmoglein 2, Desmoplakin 1&2, Collagen Type IV, Laminin, Fibronectin and Tenascin. Mutations in the sequence of tumorsuppressor gene p53 during the cultivation were uncovered by SSCP-Analysis and 'classical' sequence-analysis (Sanger). During cultivation the immunocytochemical parameters were detectable in a special order: Fibronectin and Tenascin (day 4), Desmoglein 2, Desmoplakin 1&2 and Cytokeratins 4, 13 and 14 (day 7), Collagen Type IV and Laminin (day 10). It was interesting that all markers showed a maximum in their expression after an incubation time of 14 days in the special culture system. At that time there was also the development of a basal membrane detectable (PAS-reaction). In comparison with the physiological mouth mucosa similarities in morphology and histoarchitecture became apparent (H/E-staining). In summary this new created three dimensional cultivation system mimics the in vivo situation in the human mouth cavity in an optimal way. In conclusion the isolated human cells (neither the fibroblasts nor the keratinocytes) showed also no mutations with regard to the nucleotide sequence of tumorsuppressor gene p53.
DDC:	570 Biowissenschaften 570 Life sciences
Institution:	Johannes Gutenberg-Universität Mainz
Department:	FB 10 Biologie
Place:	Mainz
ROR:	https://ror.org/023b0x485
DOI:	http://doi.org/10.25358/openscience-1146
URN:	urn:nbn:de:hebis:77-1941
Version:	Original work
Publication type:	Dissertation
License:	In Copyright
Information on rights of use:	https://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/
Appears in collections:	JGU-Publikationen