Authors:	Goldhammer, Annette
Title:	Reinigung der Vinorin-Synthase aus Zellkulturen von Rauvolfia serpentina
Online publication date:	1-Jan-2001
Year of first publication:	2001
Language:	german
Abstract:	Abstrakt - DeutschThema: Reinigung der Vinorin-Synthase aus Zellkulturen von Rauvolfia serpentina Die Arbeit befaßte sich mit der Reinigung und Charakterisierung des Enzyms Vinorin-Synthase aus Zellkulturen von Rauvolfia serpentina. Dieses Acetyl-Coenzym-A-abhängige Enzym katalysiert im Biosyntheseweg des Alkaloids Ajmalin die Umwandlung von 16-epi-Vellosimin zu Vinorin. Mit Hilfe eines neu entwickelten Enzymaktivitätstests ist eine einfache und schnelle qualitative sowie quantitative Bestimmung der Aktivität der Vinorin-Synthase möglich. Das Molekulargewicht der Vinorin-Synthase wurde durch Größenausschlußchromatographie an Superdex 75 zu 43 kD ermittelt. Das entwickelte Reinigungsschema mit den vier säulenchromatographischen Reinigungsschritten Anionenaustauschchromatographie an SOURCE 30Q, Chromatographie an Hydroxyapatit, Anionenaustauschchromatographie an Mono Q und Chromatofokussierung an Mono P führte zu einer 340fachen Anreicherung der Vinorin-Synthase. Das nach der Reinigung durchgeführten gelelektrophoretischen Untersuchungen ermöglichten keine Zuordnung einer Bande zur Bande der Vinorin-Synthase. Mögliche Ursachen für die Nichtzuordnung einer Bande im SDS-Gel zur Vinorin-Synthase sind in einer möglichen Überlagerung eines Fremdprotein mit der Vinorin-Synthase, eine niedrige Expression der Vinorin-Synthase, die eine deutlich bessere Anreicherung erfordern würde oder der Aufbau des Proteins aus Untereinheiten, in die es während der Behandlung mit SDS zerfällt, gegeben. Abstract - EnglishTopic: Purification of the vinorine synthase from cell cultures of Rauvolfia serpentina The work deals with the purification and characterisation of the enzyme vinorine synthase from cell cultures of Rauvolfia serpentina.The enzyme is acetyl coenzyme A dependent and catalyses the transformation of 16-epi-vellosimine to vinorine in the biosynthetic pathway of the alkaloid ajmaline.With the help of a newly developed enzyme assay a simple and fast determination of the activiy of the vinorine synthase is qualitatively and quantitatively possible now.The molecular weight of the vinorine synthase was determind with size exclusion chromatography to 43 kD.The developed purification protocol with four column chromatography purification steps was leading to a 340 times higher enrichment of the vinorine synthase.The gelelectrophoretic explorations that were done after the purificaion did not allow a correlation of a band to a vinorine synthase band.The reason for the non-correlation of a band to a band in the SDS gel to the vinorine synthase might be an overlay of the vinorine synthase band with a foreign protein, a too small expression of the vinorine synthase or the fact that the vinorine synthase might consist of subunits into which it disintegrates during the treatment with SDS.
DDC:	540 Chemie 540 Chemistry and allied sciences
Institution:	Johannes Gutenberg-Universität Mainz
Department:	FB 09 Chemie, Pharmazie u. Geowissensch.
Place:	Mainz
ROR:	https://ror.org/023b0x485
DOI:	http://doi.org/10.25358/openscience-1135
URN:	urn:nbn:de:hebis:77-1837
Version:	Original work
Publication type:	Dissertation
License:	In Copyright
Information on rights of use:	https://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/
Appears in collections:	JGU-Publikationen