Die Rolle von Myosin 9b und LFA-1 in Dendritischen Zellen für die DC,T-Zellinteraktion und die Induktion einer Immunantwort

Abstract

In dieser Arbeit wurde zum Einen, die Interaktionsphysiologie zwischen verschiedenen DC-Populationen und naiven sowie regulatorischen T-Zellen analysiert. Dabei wurde die Kontaktdauer und Häufigkeit bestimmt sowie die daraus folgende Aktivierung der T-Zellen in einer 3D-Kollagenmatrix. rnZum zweiten wurde die Rolle des Aktin-Motorproteins Myosin 9b, bei der Zellmigration sowie bei der DC-T-Zellinteraktion und der Ausbildung von Immunantworten untersucht. Myo9b KO DC weisen in vitro in einer Kollagenmatrix sowie in vivo einen gestörten Migrationsphänotyp auf. Auch die Interaktion mit T-Zellen ist verändert und sie induzieren eine reduzierte T-Zellaktivierung in einer 3D-Umgebung sowie eine geringere Immunreaktion in vivo. Die Zugabe pharmakologischer Inhibitoren der Rho-Signalkaskade konnte die Migration und das T- Zellstimulierungspotential wiederherstellen. rnZum Dritten wurde analysiert, welche Bedeutung die konstitutive Aktivierung des Adhäsionsmoleküls LFA-1 auf DC (LFA-1 d/d) hat. LFA-1 d/d DC zeigten verlängerte Interaktionszeiten mit T-Zellen, gefolgt von einer reduzierten T-Zellproliferation in einer Kollagenmatrix. Durch die Inhibition von aktivem LFA-1 auf den DC mittels blockierender Antikörper konnte eine Normalisierung der Interaktionsparameter und T-Zellproliferation auf Wildtyp-Niveau wiederhergestellt werden. Durch ein Ausschalten von CYTIP in WT DC und dem damit einhergehenden Verlust der Deaktivierbarkeit von LFA-1 über Cytohesin wurde ebenfalls eine erhöhte Interaktionszeit mit T-Zellen und eine reduzierte T-Zellproliferation beobachtet.rn

On the one hand this work focused on the interaction physiology of different DC-populations with naive and regulatory T cells concerning contact duration, number of contacts and the subsequent T cell activation in a 3D-collagenmatrix.rnrnIn addition the role of the actin-motorprotein myosin 9b concerning DC migration as well as DC-T cell interaction and induction of immune responses was analyzed. Myo9b KO DC showed severely impaired migration in vitro in a collagenmatrix and in vivo. Furthermore the interaction with T cells was disturbed and they induced reduced T cell activation in a 3D setting as well as reduced immune reactions in vivo. Addition of pharmacalogocal inhibitors of the Rho-signalling cascade could rescue DC-migration and T cell stimulation.rnrnMoreover the impact of constitutively active LFA-1 on DC (LFA-1 d/d) was analyzed. LFA-1 d/d DC showed prolonged contacts with T cells followed by reduced T cell proliferation in a collagenmatrix. Inhibition of active LFA-1 on DC using blocking antibodies could normalize interaction and T cell proliferation. Silencing CYTIP in WT DC and the loss of deactivation of LFA-1 via cytohesin also leads to prolonged interaction times with T cells and reduced T cell proliferation.rn